重點闡述PCR技術特點

   聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction，PCR）是一項利用 DNA 雙鏈復制原理，在生物體外復制特定 DNA 片段的的核酸合成技術。可在短時間內大量擴增目的 DNA 片段，而不必依賴大腸桿菌或酵母菌等生物體。DNA 的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈 DNA 在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在 DNA 聚合酶的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子拷貝。在實驗中發現，DNA 在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制 DNA 的變性和復性，加入設計引物，DNA 聚合酶，dNTP 就可以完成特定基因的體外復制，這是 PCR 的理論基礎。

一、反應體系
PCR 反應是在體外模擬 DNA 的復制過程，因此反應體系中必須具有 DNA 復制所需的基本要素：
1、模板（template），含有需要擴增的 DNA 片段。
2、引物（primer），一對引物決定了需要擴增的起始和終止位置。
3、聚合酶（polymerase ），DNA 聚合酶復制需要擴增的區域。
4、脫氧核苷三磷酸（dNTP），用于構造新的互補鏈。
5、緩沖液（buffer），提供適合聚合酶行使功能的化學環境。

二、技術特點
1、靈敏度高
PCR 產物的生成量是以指數方式增加的，能將皮克（pg = 10-12）量級的起始待測模板擴增到微克（μg=-6）水平。能從 100 萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR 的靈敏度可達 3 個 RFU（空斑形成單位）；在細菌學中最小檢出率為 3 個細菌。

2、特異性強
PCR 反應的特異性決定因素：
引物與模板 DNA 特異正確的結合；
堿基配對原則；
Taq 聚合酶合成反應的忠實性；
靶基因的特異性與保守性。

3、簡便、快速
只需要一次性將反應液加好后，就可以進行擴增。一般 2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。

4、純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養細胞，DNA 粗制品及 RNA 均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗漱液、毛發、細胞、活組織等 DNA 擴增檢測。