探討有關(guān)ELISA試驗(yàn)洗板

     洗板目的在于將特異性結(jié)合于固相上的抗原(抗體)與溫育過(guò)程中吸附的非特異性成份分離，使免疫復(fù)合物與待測(cè)抗體(抗原)呈一定比例，洗板是否合格直接影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

     洗板應(yīng)嚴(yán)格按照說(shuō)明控制洗板時(shí)間及洗板次數(shù)， ELISA 檢測(cè)一般用洗滌液洗板 3 次，洗滌液應(yīng)嚴(yán)格按照操作說(shuō)明進(jìn)行稀釋，洗液應(yīng)注滿每個(gè)微孔并注意洗液不外溢，垂直甩板避免交叉污染，防止出現(xiàn)假陰性及假陽(yáng)性結(jié)果。使用洗板機(jī)洗板可一定程度上避免環(huán)境污染、提高工作效率，洗滌開始時(shí)注意觀察每根吸液針是否一直插入孔底并吸干孔內(nèi)全部液體，嚴(yán)格按照要求設(shè)置一定的洗板時(shí)間及洗板次數(shù)。

    洗板過(guò)程中注意沖力大小，避免沖力過(guò)大導(dǎo)致酶結(jié)合物丟失，吸光度值偏低。洗液應(yīng)根據(jù)不同廠家的酶標(biāo)板調(diào)整注水量，注意不要溢出孔外；稀釋洗液所用的蒸餾水或去離子水酸堿度適中，使配出的洗液 pH 在 7.2~7.6 范圍內(nèi)，用非金屬容器保存，保持液體新鮮無(wú)污染、沉淀。洗板結(jié)束后將板拍干，應(yīng)垂直扣在備好的干凈的吸水紙或毛巾上，且注意每次更新干凈的吸水紙或毛巾。

洗板時(shí)還應(yīng)注意以下問(wèn)題：

1、 需每天校正注液量及殘液量，洗滌后殘液量不得大于 2μl；

2、及時(shí)更換破損吸液針，避免破壞底板包被；

3、針對(duì)不同廠家酶標(biāo)板注意調(diào)整吸液頭下降高度，避免沖洗針頭卡住酶標(biāo)板；

4、注意調(diào)整洗液量，洗液量過(guò)多將溢出，過(guò)少將達(dá)不到洗滌效果；

5、關(guān)機(jī)前使用蒸餾水沖洗管道，避免洗液的結(jié)晶物堵塞管道；

6、不同種試劑盒的洗液嚴(yán)禁混合使用。臨床操作中，工作人員由于擔(dān)心洗板次數(shù)過(guò)少達(dá)不到去除非特異性物質(zhì)的理想效果而增加洗板次數(shù)，最近研究發(fā)現(xiàn)，隨著洗板次數(shù)的增加樣本檢測(cè)的 OD 值降低，造成假陰性結(jié)果及灰區(qū)標(biāo)本的漏檢。