一、 產(chǎn)品簡介

產(chǎn)品名稱：大鼠氣管軟骨細(xì)胞組織來源氣管組織

細(xì)胞簡介

大鼠氣管軟骨細(xì)胞分離自氣管組織；氣管（Trachea），呼吸器官的一部分；為后壁略平的圓筒型管狀。上端平第六頸椎下緣，與環(huán)狀軟骨相連；向下至第四、五胸椎體（相當(dāng)胸骨角平面）交界處，分左、右主支氣管，分叉處稱為氣管杈。氣管主要由14-16個半環(huán)狀軟骨構(gòu)成，有彈性，軟骨為“C”字形的軟骨環(huán)，缺口向后，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結(jié)締組織連接，保持了持續(xù)張開狀態(tài)。軟骨由軟骨細(xì)胞和細(xì)胞間質(zhì)組成。軟骨內(nèi)的基質(zhì)呈凝膠狀態(tài)，具有較大韌性。軟骨是以支持作用為主的結(jié)締組織。軟骨內(nèi)不含血管和淋巴管，營養(yǎng)物由軟骨膜內(nèi)的血管中滲透到細(xì)胞間質(zhì)中，再營養(yǎng)骨細(xì)胞。根據(jù)細(xì)胞間質(zhì)的不同可把軟骨分為3種，即透明軟骨、彈性軟骨和纖維軟骨。透明軟骨的基質(zhì)是由膠原纖維、原纖維和周圍無定形的基質(zhì)組成。在胚胎時期有臨時支架作用，后來這種作用被骨代替。成人的透明軟骨主要分布在氣管和支氣管壁中、肋骨的胸骨端和骨的表面（關(guān)節(jié)軟骨）。

方法簡介

大鼠氣管軟骨細(xì)胞采用中性蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測

大鼠氣管軟骨細(xì)胞經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、 HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息

培養(yǎng)基                  含FBS、生長添加劑、 Penicillin、Streptomycin等

換液頻率               每3-4天換液一次                        

生長特性               貼壁

細(xì)胞形態(tài)               梭形、多角形

傳代特性               可傳5代左右； 3代以內(nèi)狀態(tài)最佳傳代比例              

傳代比例                    1:2

消化液                   0.25%胰蛋白酶

培養(yǎng)條件               氣相：空氣， 95% ；CO?   ,  5%

大鼠氣管軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限， 建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培 養(yǎng)， 以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

二、 細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細(xì)胞電子版照片

三、 使用方法

大鼠氣管軟骨細(xì)胞是一種梭形、多角形細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈貼壁，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳 5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳，建議您收到細(xì)胞后盡快進行相關(guān)實驗。

客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進行操作：

取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% CO?  、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4 h ，以穩(wěn)定細(xì)胞。

貼壁細(xì)胞消化

1）吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液1 mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液， 37℃溫浴1-3 min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5 mL完全培養(yǎng)基終止消化；

3）用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5 mL ，置于37℃、5% CO?  、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4）待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察，用于實驗；之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

細(xì)胞實驗

因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原 Ⅰ（2-5 μg/cm²),  多聚賴氨酸PLL（0.1 mg/mL），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。

四、 注意事項

●    培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個月。

●    在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。

●    消化過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

●    建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運

輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

●    該細(xì)胞只可用于科研。

備注： 由于實驗所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實驗室參考。