大鼠I型膠原ELISA試劑盒樣本使用說明

本ELISA試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中 I 型膠原（COL-I）含量。

實驗原理：

 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠 I 型膠原（COL-I）水平。用純化的大鼠 I型膠原（COL-I）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入 I 型膠原（COL-I），再與 HRP 標記的 I 型膠原（COL-I）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 I 型膠原（COL-I）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中大鼠 I 型膠原（COL-I）濃度。

標本要求:

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

樣本處理及要求：

1.血清：

全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

2.血漿：

可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

3.組織勻漿：

用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4.細胞培養物上清或其它生物標本：

1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。