1、組織脫水，透明 ：時間不能太長，否則在切片時容易碎片，切不完整。
2 、切片時展片： 有些組織在切片后難以在水中展開，這時可適當地在水中加入幾滴乙醇。
3、烤片： 60℃ 30分鐘或37℃過夜，溫度太高或時間太長，抗原容易丟失。
4、蠟塊及切片的保存： 最好在4℃保存。
5、脫片問題 ： Poly-L-Lysine(多聚賴氨酸)為目前免疫組化 染色工作中最常用的一種防脫片劑，6ml的多聚賴氨酸溶液可按1:10稀釋成60ml的工作液，適合于需要酶消化、微波、高溫高壓的防脫片處理。如不行，可用雙重處理（APES和Poly-L-Lysine）的切片。在以上兩種條件都行不通的情況下，可用如下方法：切片在脫蠟前，放在APES 1：50 丙酮溶液中浸泡3分鐘，晾干，即可進行下一步。

6、抗體稀釋： 應遵循“現用現配”的原則，對于PBS稀釋的抗體一定要當天使用。

7、背景高： 在抗體濃度、反應時間、反應溫度等合適的條件下，如果背景依舊高，可采用含1‰ Tween20的PBS洗，特別是在顯色之前要多洗。
8、返藍： 在蘇木素復染后，可用堿性緩沖液（如PBS）或Na2HPO4的飽和溶液返藍。
9、顯色： 一定要在顯微鏡下觀察，注意控制背景。

10、在整個操作過程中，切片千萬不能干燥，否則會有非特異性染色。