由于體外培養(yǎng)的細(xì)胞自身沒有抵抗污染的能力，而在培養(yǎng)基中加抗生素的抗污染能力也是有限的，因而細(xì)胞微生物污染一旦發(fā)生往往是無法挽救的。一般在細(xì)胞受到污染早期或污染較輕時(shí)，能及時(shí)處理并除去污染物，部分細(xì)胞還有可能得到挽救。
 

　　不同的微生物污染物對細(xì)胞的影響也有差別，微生物中支原體和病毒對細(xì)胞形態(tài)和技能的影響是長期的，緩慢的和潛在的。而霉菌和細(xì)菌增殖迅速，能在很短的時(shí)間內(nèi)抑制細(xì)胞生長或產(chǎn)生有毒物質(zhì)殺滅細(xì)胞。

 

　　1、霉菌污染
 

　　種類很多，污染的多是曲霉菌，白色念珠菌，酵母菌，黑霉菌，孢子菌等。霉菌污染后多數(shù)在培養(yǎng)液中形成淡黃色或是白色的漂浮物，一般肉眼可見，較易被發(fā)現(xiàn)，短期內(nèi)培養(yǎng)液多不變混濁。倒置顯微鏡下可以看見細(xì)胞之間有縱橫交錯(cuò)穿行的絲狀，樹枝狀或管狀菌絲，并漂浮在培養(yǎng)液中。很多菌絲在高倍鏡下可以看見鏈狀排列的菌株。念珠菌及酵母菌菌株呈卵圓形，散在細(xì)胞上及細(xì)胞周邊生長。
 

　　處理：確認(rèn)是霉菌污染，如果細(xì)胞種類不是特別珍貴，直接放棄，并將實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)消毒。
 

　　2、細(xì)菌污染
 

　　細(xì)菌污染較常見的有大腸桿菌，白色葡萄球菌，假單孢菌等。加用抗菌素的培養(yǎng)液可預(yù)防和排除個(gè)別一般少量細(xì)菌的污染。一旦發(fā)生細(xì)菌污染很容易發(fā)現(xiàn)，多數(shù)情況下培養(yǎng)液短時(shí)間內(nèi)變黃，表明有大量酸性物質(zhì)產(chǎn)生，出現(xiàn)明顯渾濁現(xiàn)象；有時(shí)靜置的培養(yǎng)液起初不混，但稍加震蕩，就有許多混濁物漂起。倒置顯微鏡下觀察，可見培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒物漂浮，有時(shí)在細(xì)胞表面及周圍有大量細(xì)菌存在，細(xì)胞停止生長并有中毒表現(xiàn)。必要時(shí)可取少量培養(yǎng)液涂片染色檢查以明確細(xì)菌種類；有的培養(yǎng)液改變不明顯而有疑似污染，亦可向肉湯培養(yǎng)基內(nèi)陸入少量培養(yǎng)液，37℃培養(yǎng)以檢測。
 

　　處理：一般用抗生素的常用量的5~10倍作沖擊療法，用藥24~48小時(shí)后再換常規(guī)培養(yǎng)液，有時(shí)在早期污染時(shí)此法有效。細(xì)胞培養(yǎng)中用抗生素多為預(yù)防細(xì)菌污染，一半多聯(lián)合應(yīng)用。一旦發(fā)生污染后再使用抗生素常常難以除掉，有的抗生素只有抑菌作用而無殺菌效應(yīng)。
 

　　3、支原體污染
 

　　支原體是一種大小介于細(xì)菌和病毒之間(最小直徑0.2um)并獨(dú)立生活的微生物.約有1%可通過濾菌器。支原體無細(xì)胞壁形態(tài)呈高度多形性.可為圓形、絲狀或梨形。
 

　　支原體形態(tài)多變，在光境下不易看清內(nèi)部結(jié)構(gòu)。多數(shù)支原體適合于偏堿條件下生存(PH7.6-8.0)，對酸耐受性差。對熱比較敏感，對一般抗生素不敏感。
 

　　支原體污染細(xì)胞后.培養(yǎng)液可不發(fā)生混濁.多數(shù)情況下細(xì)胞病理變化輕微或不顯著，細(xì)微變化也可由于傳代、換液而緩解.因此易被忽視。但個(gè)別嚴(yán)重者，可致細(xì)胞增殖緩慢.甚至從培養(yǎng)器皿脫落。為確定有無支原體污染可做如下檢測：
 

　　a:相差顯微境檢測；b:熒光染色法；c:電鏡檢查；d:DNA分子條文檢查或支原體培養(yǎng)等方法。處理：市場上有多種支原體清除試劑盒，效果比較好。
 

　　4、酵母污染
 

　　酵母到處存在，并能在合適的環(huán)境中快速生長。酵母污染很容易觀察到，培養(yǎng)物變渾濁，尤其在后期。一般PH值變化很小，嚴(yán)重時(shí)，PH值升高。顯微鏡下呈卵圓形或球形顆粒，有些會(huì)芽生較小顆粒。
 

　　5、病毒污染
 

　　組織細(xì)胞培養(yǎng)過程中，如果沒有除去潛在的病毒，就會(huì)產(chǎn)生病毒污染。目前，從原代猴腎細(xì)胞的培養(yǎng)中已發(fā)現(xiàn)不少于20種血清性病毒。
 

　　盡管病毒污染的細(xì)胞不影響原代培養(yǎng)，但生產(chǎn)疫苗是不安全的。因此，潛在病毒是細(xì)胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。
 

　　6、細(xì)胞交叉污染
 

　　細(xì)胞污染和細(xì)菌污染不同，細(xì)胞污染是由于在培養(yǎng)過程中各種細(xì)胞同時(shí)進(jìn)行，而所用器具或液體混雜使用所致。這種污染沒有微生物存在，但使培養(yǎng)細(xì)胞不同種類之間發(fā)生混亂，細(xì)胞生長特性，形態(tài)發(fā)生變化。有些變化輕微，不易察覺，有些則可能由于污染的細(xì)胞具有生長優(yōu)勢而最終壓過原來細(xì)胞而導(dǎo)致細(xì)胞生長的抑制，最終死亡。污染過的細(xì)胞由于種類不純，無法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。
 

　　7、預(yù)防污染方法
 

　　需要考慮的注意事項(xiàng)：
 

　　1、進(jìn)入培養(yǎng)間時(shí)，保持雙手潔凈。使用肥皂全清洗后，酒精干燥(不用紙巾)；
 

　　2、佩戴手套(保證手套可以被消毒)；
 

　　3、穿著帶有松緊袖口的實(shí)驗(yàn)服；
 

　　4、不要隨便觸碰無關(guān)物品(例如：電話、門把手、甚至說是整理頭發(fā)等)；
 

　　5、避免佩戴手表、戒指和其他首飾；
 

　　6、脫去在其他地方接觸過動(dòng)物的衣服；
 

　　7、患有感冒的人員需佩戴面罩。
 

　　良好規(guī)范的操作：
 

　　1、為您的CO2培養(yǎng)箱建立一套日常的標(biāo)準(zhǔn)清洗程序(清潔區(qū)域需要包括培養(yǎng)箱周圍的區(qū)域，特別是培養(yǎng)箱的頂部)；
 

　　2、經(jīng)常檢查實(shí)驗(yàn)室的其他設(shè)備是否受到污染(例如：洗手池/離心機(jī)等)；
 

　　3、有計(jì)劃放置您的培養(yǎng)箱，盡量減少開門時(shí)間和不必要的移動(dòng)；
 

　　4、快速開關(guān)CO2培養(yǎng)箱；
 

　　5、限制使用同一培養(yǎng)箱的人數(shù)；
 

　　6、盡快清除溢出物，之后用酒精清潔；
 

　　7、舍棄水純化系統(tǒng)最初得到的水。
 

　　注重培養(yǎng)過程：
 

　　1、細(xì)胞培養(yǎng)需要經(jīng)常性地檢查是否被污染；
 

　　2、使用半個(gè)開放培養(yǎng)皿盛放組織培養(yǎng)基。開口放置于培養(yǎng)箱中1至4個(gè)小時(shí)。蓋上培養(yǎng)皿蓋子。37℃培養(yǎng)24-72小時(shí)。觀察現(xiàn)象。
 

　　3、早期發(fā)現(xiàn)污染可以提高培養(yǎng)物存活的幾率；
 

　　4、不要混用、共享培養(yǎng)皿或培養(yǎng)基；
 

　　5、不要令盛放培養(yǎng)基的容器開口放置過長時(shí)間；
 

　　6、全被污染的培養(yǎng)涉及物需要用高壓滅菌消毒；
 

　　7、盡量使用一次性預(yù)滅菌培養(yǎng)耗材。